瓊脂糖凝膠4B 操作小貼士

產品簡介：瓊脂糖凝膠4B瓊脂糖凝膠4B 是用4%濃度瓊脂糖制備成的球型顆粒，作為凝膠層析介質使用。本品為乳白色球狀凝膠，無嗅、無味、無肉眼可見雜質。 

保存：
產品應密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20%乙醇），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃（20%乙醇）。本品應避免與氧化劑接觸，避免長時間暴露在空氣中。

操作說明：
本產品為傳統的瓊脂糖介質，非特異性吸附低，回收率高，可多次重復使用等特點，用于分子量差異大、對分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。
1. 裝柱
凝膠過濾介質的使用對裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過柱子上加一個裝柱器來使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進行檢驗。以下過程為通用介質裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩定后將柱床壓緊，接好管路。
(1) 讓所有的材料和試劑達到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。
(2) 選擇一根一定直徑的柱子，長約30~60cm，根據柱子大小取所需量的凝膠（約為柱床體積的1.15 倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1 的比例）配成勻漿。不要劇烈攪動，以免攪壞微球。
(3) 將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。
(4) 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
(5) 打開蠕動泵，讓緩沖液緩慢流過，使柱床穩定。
(6) 最好用一個裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。
2. 平衡
讓緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH 不變。
3. 上樣
(1) 樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理，再上樣。
(2) 介質對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的，分子量大的先流出來。
(3) 上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。
4. 洗脫
用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。
5. 再生
一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。
6. 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時候，始終要避免柱子流干氣泡進入。